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時間：2021-08-17 11:18:00
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編輯：乙肝新聞
由于技術(shù)發(fā)展所限，現(xiàn)有技術(shù)手段還沒辦法徹底根除細(xì)胞內(nèi)的乙肝病毒（HBV）cccDNA，cccDNA在細(xì)胞內(nèi)的持續(xù)存在給乙肝病毒蛋白的持續(xù)表達(dá)提供了源泉，并且致使部分慢性乙型肝炎病毒感染發(fā)展為肝癌，提示目前的治療策略仍有較大的局限性，需要開發(fā)新的治療策略以解決問題。
基因沉默技術(shù)在處理乙肝病毒感染上有可能是一項(xiàng)有價值的策略，乙肝病毒（HBV）X基因（HBX）由于其末端共定位（co-terminallocalization），可能是一個基因沉默技術(shù)最佳的靶標(biāo)。
在2021年的歐洲肝病學(xué)會年會上，來自巴塞羅那瓦勒德希伯倫大學(xué)醫(yī)院（VallD’hebronUniversityHospital）等研究機(jī)構(gòu)的研究人員介紹了一種基于反義鎖核酸(LNA)Gapmer(GP)和靶向HBX超保守區(qū)域的siRNA基因治療策略。
首先，研究人員將HepG2-NTCP細(xì)胞用2.5％DMSO處理至少14天，然后通過在37oC環(huán)境下以500個基因組當(dāng)量的HBV進(jìn)行感染旋轉(zhuǎn)接種（spinoculation）1h，并孵育過夜。在感染后第48h或第5天，使用TransIT-X2（Mirus）用Gapmer（GP）（50nM的GP1和/或GP4，Qiagen）和/或siRNA（50nM）處理感染的細(xì)胞。每個實(shí)驗(yàn)中都使用了一個加干擾的對照Gapmer。
處理72小時后收集細(xì)胞和上清液。通過RNAeasyPlus微型試劑盒（Qiagen）從細(xì)胞中提取前基因組RNA（pgRNA），并使用TaqMan探針（Roche，Lightcycler?480）通過RT-qPCR進(jìn)行定量。通過化學(xué)發(fā)光酶法（Roche，COBAS?8000）對上清液中的HBsAg和HBeAg進(jìn)行定量。
研究結(jié)果顯示，感染后早期（在感染后48h時），GP1處理使pgRNA、HBeAg和HBsAg的抑制率均超過70%（分別為75.5±9.9%；74.7±6.4%和72.4±7.7%）。
不同的是，GP4的抑制作用比GP1低7.4到13個百分點(diǎn)（pgRNA、HBeAg和HBsAg分別為62±17%；66.1±11.2%和64.7±12%）。
當(dāng)GP在感染后稍晚期（感染后第5天）引入時，GP1和GP4對pgRNA的抑制作用均降低（分別為53.5±29%和58.5±17%）。
如果考慮病毒蛋白表達(dá)，則效率較低（兩種GP均低于48%）。
值得注意的是，兩種GP或GP與siRNA的組合提高了pgRNA的抑制效率（GP1+GP4；GP1+siRNA；GP4+siRNA分別為69.1±16.5%；66.7±12.2%；63.8±21%），只是部分改善病毒蛋白抑制。
綜上數(shù)據(jù)，研究認(rèn)為在體外環(huán)境中Gapmers似乎是抑制HBV表達(dá)的有價值的分子。通過將GP相互組合或與針對同一超保守區(qū)域的siRNA組合，可以提高它們在建立生產(chǎn)性感染(5dpi)后的有限效率。
然而，研究人員認(rèn)為還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證實(shí)這些結(jié)果，并測試其他遞送系統(tǒng)以提高治療效率。（更多肝病新藥研究信息敬請關(guān)注“肝臟時間”微信公眾號）！
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